第281章 变异感染者DNA提取（2 / 2）
4.准备70c温浴。
5.使用前检查bufferbL是否有沉淀析出，若出现沉淀，请于70c温浴加热至沉淀完全溶解后再使用。
完成试剂准备工作之后，在钟教授的首肯之下，研究员开始进行dNA的提取。
具体操作步骤如下：
1.向96圆孔板的每孔中加入20ul蛋白酶K。
2.加200ul抗凝全血到96圆孔板中。
~undefed若全血样品体积少于200ul，用pbS补充到200ul。
~undefed若样品为鸟类血，样品用量须低于10ul。
~undefed若需得到RNA-free的基因组dNA，在步骤3加入bufferbL前加入dNase-free的RNaseA(20g\/l)。
3.加200ulbufferbL，注意不要打湿每孔的边缘，用96圆孔硅胶片密封各孔。
4.用力混合30s。
5.3000rp简短离心使96圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rp后即停止。
6.在培养箱或烘箱中70c温浴至少10。
7.3000rp简短离心使96圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rp后即停止。
8.取下96圆孔硅胶片，每孔加入200ul乙醇（96-100%）。
9.用96圆孔硅胶片密封各孔，用力混匀混合15s。3000rp简短离心使96圆孔硅胶片上的溶液到圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rp后即停止。
10.将96孔dNA板放到一洁净的96孔1.6l深孔板。取下圆孔板上的96圆孔硅胶片，将每孔中的溶液转移至96孔dNA板中，6000rp离心4。
11.丢弃96孔1.6l深孔板的滤液，将96孔dNA板放回到96孔1.6l深孔板上，每孔加入500ulbufferw1b，用一新的bF-400膜密封96孔dNA板，6000rp离心4。
~undefed确认在bufferw1btrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
12.丢弃96孔1.6l深孔板的滤液，将96孔dNA板放回到96孔1.6l深孔板上，每孔加入850ulbufferw2，用另一新的bF-400膜密封96孔dNA板，6000rp离心4。
~undefed确认在bufferw2trate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
13.弃滤液，将96孔dNA板放回到96孔1.6l深孔板上，每孔加入400ulbufferw2，用另一新的bF-400膜密封96孔dNA板，6000rp离心4。
14.将96孔dNA板放在一洁净的96孔1.6l深孔板上，用bF-400膜密封96孔dNA板，6000rp离心15。
15.将96孔dNA板放在另一洁净的96孔1.6l深孔板上，每孔加入100-200ulEentb或去离子水，室温静置2，用另一新的bF-400膜密封96孔dNA板，6000rp离心4洗脱得到dNA。
看着最终提取出来的dNA样本，钟教授终于露出了满意的微笑......最近转码严重，让我们更有动力，更新更快，麻烦你动动小手退出阅读模式。谢谢
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